广西沼泽型水牛γ-干扰素基因的克隆与原核表达

摘要：

本研究克隆了广西沼泽型水牛γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因,并构建了水牛IFN-γ原核表达质粒.从健康沼泽型水牛静脉无菌采血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用刀豆素A(Concanavalin A,ConA)诱导培养13 h后,提取细胞总RNA,用水牛IFN-γ基因特异性引物通过RT-PCR扩增水牛IFN-γ成熟肽编码区cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体中.RT-PCR产物电泳可见约457 bp大小目的片段.经过限制性酶切分析,测序证实克隆得到的基因序列正确.将IFN-γ成熟肽编码区基因片段切下亚克隆到表达载体pET-32a+中,构建成重组表达质粒pET-mIFN-γ.PCR、双酶切电泳和序列测定结果均证实已插入约457 bp的IFN-γ基因片段.经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,水牛IFN-γ基因在大肠杆菌中获得了高效的表达,融合蛋白的分子量为35 ku,表达量占菌体总蛋白的43.6%.

关键词：沼泽型水牛、γ-干扰素、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：26

分类号：S823.83(家畜)

资助基金：广西自然科学基金桂科基0448001

在线出版日期：2007-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：210-214