流感复合多表位疫苗的设计及小鼠免疫研究
@@ 鉴于目前出现了多种亚型禽流感病毒共存的局面,研究多价流感疫苗具有重要意义.根据各表位的免疫学特性,结合分子生物学信息软件的模拟功能,以H3、H9亚型流感病毒的HA抗原表位、流感病毒的其他主要抗原(NP、NA、M)表位的基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成大小为765 bp的复合多表位基因盒-Epi.将Epi基因克隆入真核表达载体pIRES1neo中,构建DNA重组体pIR-Epi;将H7HA、Epi、H5HA基因以融合表达方式克隆到pIRES1neo中,构建了DNA重组体pIRE-H57-Epi.以上述构建的DNA重组体与鸡痘病毒重组株对BALB/c小鼠进行免疫接种后,检测体液与细胞免疫指标.研究结果表明,流感病毒复合多表位DNA重组体pIRE-H57-Epi、pIRE-Epi免疫组小鼠均能产生针对H3亚型流感病毒的特异性抗体,抗体效价(1∶1 600～1∶6 400)低于灭活疫苗免疫组(1∶12 800),但均高于其他对照免疫组(P＜0.01).pIRE-H57-Epi免疫组抗H5、H7 HA抗体效价分别为1∶12 800和1∶6 400,均高于其他免疫组(P＜0.05).pIRE-Epi免疫组抗H5、H7 HA抗体效价(1∶200,1∶100)较低,与其他对照免疫组差异不显著.pIRE-H57-Epi与pIRE-Epi免疫组抗H9亚型AIV的HA抗体效价(1∶6 400,1∶3 200)明显高于其他免疫组(P＜0.05).与PBS对照组及空质粒pIRES1neo对照组比较,用所构建的重组体免疫的各试验组小鼠的T淋巴细胞亚类CD4+和CD8+的数量显著提高(P＜0.05).pIRE-H57-Epi与pIRE-Epi试验组的CD4+与CD8+淋巴细胞的数量较灭活苗显著增多(P＜0.05),而各重组体免疫组之间差异不显著.此外,所有组的CD4+/CD8+比值均稳定在1.5～2.0,表明无异常免疫应答出现.ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ斑点数实验结果表明,pIRE-H57-Epi、pIRE-Epi试验组的IFN-γ斑点数量(＞70)比灭活苗(＜40)显著增多(P＜0.05),而各重组体免疫组之间差异不显著.上述结果说明,所构建的DNA重组体有良好的免疫原性,为最终获得能同时预防多种亚型流感病毒的多价疫苗奠定了基础.
禽流感病毒、表位、疫苗
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S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)
吉林省长春市科技发展计划项目04-02GG217
2006-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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209-210
