猪IGF-Ⅰ mRNA实时荧光定量PCR定量标准的构建

摘要：

采用RT-PCR的方法利用肝组织提取的总RNA制备猪胰岛素样生长因子Ⅰ(pIGF-Ⅰ)cDNA目的片断,与pMD-18T vector连接成重组质粒,并转化Escherichia coli DH5α.联合应用PCR鉴定、α互补法、限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.测定纯化的重组质粒A260,确定浓度并以此制备实时荧光定量PCR(FQ-PCR)梯度浓度参考标准.结果表明:pIGF-Ⅰ cDNA目的片断成功制备,并获得稳定的重组质粒,保持了目的片断序列的特异性和完整性,成功构建了pIGF-Ⅰ实时FQ-PCR的定量参考标准.

关键词：猪、胰岛素样生长因子Ⅰ、参考标准

所属期刊栏目：25

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：国家振兴东北老工业基地科技攻关项目2004BA907A22

在线出版日期：2006-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：10-14