黄喉拟水龟Cathelicidin基因克隆及表达分析

摘要：

[目的]克隆黄喉拟水龟(Mauremys mutica)Cathelicidin基因(MmCath)并分析其组织表达特征,为深入研究MmCath基因在黄喉拟水龟先天免疫中的潜在作用提供理论依据.[方法]运用RACE克隆黄喉拟水龟MmCath基因cDNA序列,利用生物信息学软件进行序列特征分析,并通过实时荧光定量PCR检测MmCath基因在黄喉拟水龟不同组织中的表达特征及细菌攻毒后的表达情况.[结果]MmCath基因cDNA序列全长777 bp,包括63 bp的5'非编码区、483 bp的开放阅读框(ORF)和231 bp的3'非编码区.MmCath基因编码160个氨基酸残基,包括N端的信号肽区,含有4个保守半胱氨酸(Cys)残基的Cathelin肽区和C端的成熟肽区,符合Cathelicidins蛋白家族典型特征.MmCath前体蛋白相对分子质量为17.74 kD,理论等电点(pI)为5.27,其二级结构中α-螺旋占31.25%,无规则卷曲占20.63%,β-折叠占48.12%.黄喉拟水龟MmCath前体蛋白氨基酸序列与西部锦龟(Chrysemys picta bellii)Cathelicidin氨基酸序列的相似性最高,达80.63%,亲缘关系最近.MmCath基因在黄喉拟水龟的表达具有组织差异性,以脾脏和肝脏中的相对表达量较高,在表皮、心脏、肾脏、肺脏、脑、肠道和肌肉等组织中的相对表达量较低;嗜水气单胞菌(Aeromonas hy-drophila)攻毒后MmCath基因表达上调,在攻毒后第3和第6h其相对表达量极显著高于攻毒前(0 h)的相对表达量(P<0.01,下同),之后有所下降,在攻毒后第36h再极显著上升,随后下降.[结论]从黄喉拟水龟中克隆的MmCath基因属于Cathelicidins基因家族,参与了黄喉拟水龟抗病原感染过程,可为有效控制黄喉拟水龟细菌性疾病提供新思路.

关键词：黄喉拟水龟、Cathelicidin基因、基因克隆、表达特征

所属期刊栏目：54

分类号：S947.1(水产保护学)

在线出版日期：2023-10-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1559-1567