利用pHDE-Cas9构建巨桉CTX基因家族CRISPR载体

摘要：

[目的]利用高效基因编辑系统(pHDE-Cas9)构建巨桉细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)基因家族规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)载体,为开展巨桉CTX基因家族功能验证研究打下基础.[方法]设计巨桉CTX基因靶位点和引物,扩增pCBC质粒上的目的片段,BsaⅠ酶切pHDE载体并与目的片段连接形成重组质粒,转化DH5α感受态细胞.提取单克隆进行菌液PCR初步验证、重组质粒PCR验证,挑选阳性克隆质粒进行测序分析,构建CTX基因家族CRISPR载体.[结果]重组质粒PCR鉴定及测序结果表明,重组载体序列无突变,与预期序列高度一致.成功构建了巨桉CTX基因家族pHDE-CTXA、pHDE-CTXB和pHDE-CTXC同源表达载体.[结论]利用pHDE-Cas9成功构建了巨桉CTX基因家族CRISPR载体,构建过程快速、高效,为桉树基因组定点编辑打下了基础,也可为其他桉树CRISPR/Cas9表达载体的构建提供借鉴.

关键词：巨桉、规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)、细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(CTX)、载体构建

所属期刊栏目：49

分类号：S792.39(森林树种)

资助基金：国家自然科学基金项目31470677;广东省科技计划项目2017A030303087;广东省高校果蔬加工与贮藏工程技术开发中心项目2012gczxB001;广东省大学生攀登计划项目pdjh0343

在线出版日期：2018-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：411-417