广西巴马小型猪ANK1基因启动子克隆及其活性分析

摘要：

[目的]克隆广西巴马小型猪ANK1基因启动子,确定其活性核心区,为研究ANK1基因启动子与肉质性状的相关性及构建动物疾病模型打下基础.[方法]通过在线软件对ANK1基因启动子的转录因子结合位点进行预测,根据转录因子结合位点设计特异引物扩增不同长度的ANK1基因启动子片段,并利用双荧光素酶试剂盒检测其荧光值,以确定不同ANK1基因启动子片段的活性.[结果]发现ANK1基因启动子存在1个转录起始位点(TSS)、2个CpG岛和多个转录因子结合位点,并以此作为ANK1基因启动子的分段依据,将其分割为P638、P791、P1113、P1163、P1648、P1694、P1796和P2074等8个不同长度的目的片段.成功克隆获得的8个ANK1基因启动子片段经KpnⅠ和HindⅢ双酶切、T4真核表达载体连接、细胞转染等方法构建8个双荧光素酶重组报告基因,双荧光素酶试剂盒检测结果显示,广西巴马小型猪ANK1基因启动子在P1796片段活性最强,与其他片段存在显著差异(P<0.05).[结论]成功克隆获得广西巴马小型猪ANK1基因启动子的8个片段,且利用双荧光素酶试剂盒检测确定其核心启动子区域出现在P1796片段.

关键词：广西巴马小型猪、锚蛋白(ANK)、ANK1基因、启动子、活性分析

所属期刊栏目：48

分类号：S828.89(家畜)

资助基金：国家现代农业产业技术体系广西巴马小型猪产业创新团队建设项目NYCYTXGXCXTD-03-15;广西科学研究与技术开发计划项目桂科能14123006-4

在线出版日期：2017-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：716-720