PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定

摘要：

[目的]构建PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库,为深入研究猪伪狂犬病病毒(PRV)与宿主细胞间的相互作用机制打下基础.[方法]提取PK-15细胞总RNA,采用SMART和LD-PCR合成全长的双链cDNA(ds cDNA),并对其进行均一化和SfiI酶切处理.处理后的ds cDNA分别连接3种阅读框pGADT7-SfiI载体,将连接产物转化至大肠杆菌BH5α构建三框cDNA初级文库,取三框cDNA初级文库进行混合扩增,通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集文库细菌提取文库质粒.[结果]3种读码框cDNA文库的库容量分别为3.0× 106、2.0× 106和2.0× 106 CFU,文库实际扩增基数＞150万CFU;一号和三号读码框的基因重组率均为100％,二号读码框的基因重组率大于93％.cDNA文库外源基因插入片段长度在500～3000 bp.cDNA文库质粒浓度约1.0 mg/mL,质粒收获量约3.0 mg.[结论]构建的PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库具有较高的重组率和库容量,符合酵母双杂交筛选要求,可用于研究PRV与PK-15细胞间的相互作用机制.

关键词：PK-15细胞、酵母双杂交、三框cDNA文库、均一化、猪伪狂犬病病毒(PRV)

所属期刊栏目：47

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31502079,31402151;广西自然科学基金项目2015GXNSFBA139067,2015GXNSFBA139077

在线出版日期：2016-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：726-730