不同种属H1启动子驱动miR-1在PK15细胞中的表达情况

摘要：

[目的]筛选出能高效表达外源性成熟miR-1的真核表达载体,为揭示miR-1参与猪肌肉发育及肉质性状形成的分子机制奠定基础.[方法]分别克隆巴马小型猪miR-1前体序列、H1启动子序列及人类H1启动子序列,并构建不同种属H1启动子驱动其表达的真核表达载体,利用脂质体法转染PK15细胞后,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测不同种属H1启动子表达载体驱动miR-1表达效率.[结果]经酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了3个miR-1过表达载体(pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1),以其转染PK15细胞24和48 h后,荧光显微镜观察发现绝大部分细胞都发出绿色荧光,且含有H1启动子细胞的荧光强于无H1启动子细胞.转染pEGFP-pH1-miR-1细胞、转染pEGFP-hH1-miR-1细胞、转染pEGFP-miR-1细胞的miR-1相对表达量分别为105.02、99.00和79.65,其miR-1表达水平均极显著高于转染pEGFP-C1细胞和空白对照组细胞(P＜0.01).[结论]重组质粒pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH 1-miR-1均能在PK15细胞中高效表达miR-1,即猪源与人源的H1启动子均能提高外源性miR-1表达,可用于后续的miR-1功能研究.

关键词：巴马小型猪、H1启动子、miR-1、PK15细胞、真核表达载体

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分类号：S828.89;Q786(家畜)

资助基金：国家自然科学基金项目30960058;国家现代农业产业技术体系广西生猪创新团队建设项目nycytxgxcxtd-03-15

在线出版日期：2016-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2020-2025