农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化

摘要：

[目的]采用正交设计L25(56)优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为:预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4～6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6％;最终获得4株转AtMYB118基因植株.[结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.

关键词：橡胶树、农杆菌介导的遗传转化、AtMYB118基因、反转录PCR、易碎胚性愈伤组织、转基因植株

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分类号：S794.1(森林树种)

资助基金：Chinese State International Scientific and Technological Cooperation Program2008DFA32020;"948" International Scientific and Technological Cooperation Project financially supported by Chinese Ministry of Agriculture2010-S7;CATAS Fundamental Research Fund1630022013029

在线出版日期：2014-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1137-1146