农杆菌介导美味猕猴桃基因转化影响因素研究

摘要：

[目的]建立美味猕猴桃叶片外植体转化体系,为猕猴桃遗传转化研究奠定良好基础.[方法]以美味猕猴桃组培苗叶片为材料,研究不同浓度乙酰香酮(AS)对外植体β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)瞬时表达阳性率的影响,及暗培养时间与抗褐化剂二硫苏糖醇(DTT)、聚乙烯呲咯烷酮(PVP)对外植体褐化、抗性芽诱导的影响.[结果]仅在侵染菌液中添加AS时,100、150、200 μmol/L AS 3个处理的外植体GUS阳性率均极显著高于对照,分别为14.6％、16.7％、10.7％;而当农杆菌侵染液与共培养基中同时添加100～150μmol/L AS,可使GUS瞬时表达阳性率提高至37.9％.选择培养初期经过2～12 d暗培养后,外植体褐化率不断下降,抗性芽诱导率不同程度提高,其中以暗培养6、8d处理的褐化率相对较低,分别为33.2％和30.6％,且相应的抗性芽诱导率最高,分别为14.2％和13.1％,极显著高于其他处理与对照.在分化培养基中添加1.0～2.0 g/L的DTT并暗培养6d的效果优于对应浓度的PVP;其中1.5 g/L DTT并暗培养6d,可使外植体褐化率降至13.4％,卡那霉素抗性芽诱导率提高至24.3％.卡那霉素抗性植株叶片GUS染色与PCR扩增结果显示,ShivaA基因已转化至美味猕猴桃秦美.[结论]AS不同使用方式及其浓度对叶片GUS瞬时阳性表达率的提高具有明显影响;选择培养初期进行暗培养6～8 d或暗培养结合添加1.0～2.0 g/L DTT抗褐化剂,均可降低美味猕猴桃叶片转化芽再生过程中的褐化,提高转化效率.

关键词：美味猕猴桃、外植体、褐化、Shiva A基因、转化效率

所属期刊栏目：45

分类号：S663.4(果树园艺)

资助基金：广西自然科学基金项目2011GXNSFA018102

在线出版日期：2014-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：551-557