鸡IL-6、IL-17和IFN-γ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

[目的]建立针对鸡白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ)的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的鸡IL-6、IL-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验.[结果]GAPDH、IL-6、IL-17和IFN-γ的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2％、99.2％、102.0％和100.8％,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458.特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00％.[结论]建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源IL-6、IL-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台.

关键词：鸡、IL-6、IL-17、IFN-γ、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：44

分类号：S854.45(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31160512;广西科技攻关项目桂科重1222003-2-4,桂科攻10100014-5;广西特聘专家专项项目2011B020

在线出版日期：2013-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1740-1745