南美白对虾精子超低温冷冻保存技术研究

摘要：

[目的]建立一种南美白对虾精子超低温冷冻保存方法,为南美白对虾优良种质的长期保存奠定基础.[方法]利用胰蛋白酶消化法获得游离的南美白对虾精子,分别使用灭菌天然海水、无钙人工海水、3％等渗NaCl溶液和0.9％生理盐水作为基础液,并以不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)、甘油、甲醇及其与海藻糖的混合溶液作为抗冻剂,在4种不同降温程序下超低温冷冻保存南美白对虾精子,然后在不同的温度下复苏冷冻精子,以伊红-苯胺黑染色法检测精子存活率.[结果]使用1.00 g/L胰蛋白酶消化精荚5 min能获得大量游离的南美白对虾精子,以灭菌天然海水为基础液,以10％ DMSO和0.25 mol/L海藻糖为抗冻剂,在P-1降温程序(4℃平衡30 min,以-5℃/min的速率降至-20 ℃:-20℃平衡5 min,以-10℃/min的速率降至-80 ℃;-80℃平衡5 min,然后置于液氮中保存)下超低温冷冻保存南美白对虾精子,经37℃水浴复苏后精子存活率最高.[结论]建立的南美白对虾精子超低温冷冻保存方法具有可行性,为南美白对虾精子冷冻保存库的建立提供了技术支撑.

关键词：南美白对虾、精子、超低温冷冻保存、胰蛋白酶消化法、抗冻剂、存活率

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分类号：S945.46(水产保护学)

资助基金：广西直属公益性科研基金项目2060302CXIF-2011-01;广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室开放项目GXKL-AQUA-2011-03

在线出版日期：2013-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1382-1389