牛分枝杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

[目的]建立一种检测牛分枝杆菌的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR,为防控牛结核病提供技术支持.[方法]根据牛分枝杆菌特异性基因序列(No.MBU87961,gi9954088)设计合成一对扩增牛分枝杆菌的特异性引物,从引物设计、各成分配比、样品采集及样品DNA提取等方面进行优化,并对建立的方法进行标准曲线、溶解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验.[结果]牛分枝杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的检测模板范围为1.0×109～1.0x10拷贝/μL时,其标准曲线呈良好的线性关系,溶解曲线表现为单一波峰,Tm值为86.48～86.65C.SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的牛型分枝杆菌扩增结果为阳性,其他参试菌株均为阴性;可检测出10拷贝/μL的牛分枝杆菌DNA,敏感性是常规PCR的100倍;Ct值变异系数小于5％,重复性好;对50份PPD检测为阳性的牛鼻黏液、牛奶和淋巴结进行检测,其结果与常规PCR检测结果一致.[结论]建立的SYBR Grccn Ⅰ实时荧光定量PCR具有快速、便捷、准确等优点,适合于牛分枝杆菌的鉴别诊断.

关键词：牛结核病、牛分枝杆菌、SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR、检测

所属期刊栏目：43

分类号：S858.23;S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：新世纪百千万人才工程国家级人选专项基金项目945200603;公益性行业农业科研专项项目201103008;广西特聘专家专项经费资助项目2011B020;广西科技攻关项目桂科转0626001-5-1;广西水产畜牧局科研计划项目桂渔牧科08283-20,桂渔牧科09254-18

在线出版日期：2013-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1584-1589