籼稻GAD基因的克隆、序列分析及其植物表达载体构建

摘要：

[目的]克隆籼稻谷氨酸脱羧酶(GAD)基因的全长cDNA,并进行序列分析和植物表达载体构建,为改良水稻的营养保健品质奠定基础.[方法]根据已知植物GAD基因的保守区域设计引物,以高GABA籼稻品系“新-9-4”的胚芽为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆GAD基因的全长cDNA；扩增其编码序列,构建双T-DNA植物表达载体.[结果]扩增获得长1962 bp的籼稻GAD基因全长cDNA(OsiGAD),包含1479 bp的开放阅读框,编码492个氨基酸.OsiGAD与已报道的水稻GAD基因OsGAD1、OsGAD2、OsGAD3的核苷酸序列同源性分别为67.1％、69.4％、98.3％,推导氨基酸序列的同源性分别为77.6％、70.1％、100.0％.OsiGAD蛋白序列具有磷酸吡哆醛结合位点和与钙调蛋白结合的C端延伸区域；构建了其具有水稻胚乳特异表达特性的双T-DNA植物高效表达载体pCDMAR-OsiGAD-hpt,选择标记基因和OsiGAD-因分别位于此载体的两个不同T-DNA区.[结论]克隆获得的籼稻GAD基因OsiGAD长1962 bp,并成功构建了其双T-DNA植物高效表达载体.

关键词：籼稻、谷氨酸脱羧酶(GAD)、γ-氨基丁酸(GABA)、基因克隆、序列分析、载体构建

所属期刊栏目：43

分类号：S511;Q781(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金项目30471073;国家转基因重大专项项目2009ZX08001-032B;福建省科技合作计划重点项目2010I0001;福建省科技计划重点项目2010N0003

在线出版日期：2012-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1079-1085