TaqMan-LNA探针荧光定量PCR快速检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒

摘要：

[目的]建立快速、特异、灵敏检测对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的TaqMan-LNA探针荧光定量PCR方法,为IHHNV的临床诊断和疫情监测提供更简便的检测技术.[方法]根据GenBank已发表的IHHNV毒株序列,在IHHNV保守区序列设计特异性引物和TaqMan-LNA探针；对荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性和灵敏度；应用TaqMan-LNA探针荧光定量PCR对广西地区的300份凡纳滨对虾样品进行检测,验证方法的实用性.[结果]TaqMan-LNA探针荧光定量PCR检测IHHNV的灵敏度高,约为10个病毒粒子/反应,定量范围宽,在1.6×101～1.6×108拷贝/μL的范围内具良好的线性关系；与SPF凡纳滨对虾组织、WSSV、副溶血弧菌的DNA和TSV的RNA均无反应,特异性好；组内变异系数为0.53％～1.75％,组间变异系数为0.81％～1.14％,重复性和重现性均较好,结果稳定可靠；临床应用结果表明,300份凡纳滨对虾样品检出193份阳性,阳性率为64.3％,表明广西沿海地区养殖的凡纳滨对虾IHHNV感染率较高.[结论]利用TaqMan-LNA探针建立检测IHHNV的荧光定量PCR方法具有快速、特异、灵敏、重复性好、能定量等优点,可用于对虾IHHNV的检测.

关键词：凡纳滨对虾、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、TaqMan-LNA探针、荧光定量PCR

所属期刊栏目：42

分类号：S945.4(水产保护学)

资助基金：广西直属公益性科研院所基本科研业务费专项项目2060302GXIF-2009-05

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1545-1549