SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立

摘要：

为建立一种定量检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法,针对δC、δNS基因分别设计了1对特异性引物,同时选择了1对内参基因β-actin引物,将常规PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,梯度倍比稀释作为标准品,用于构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测δC、δNS基因及内参基因β-actin的标准曲线.结果表明,建立的标准曲线具有良好的线性关系,R2均在0.99以上;最小检出量为10拷贝/μL的阳性标准品,且具有良好的重复性,能够校正抽提样品中细胞数量不均带来的差异.可见,SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法能满足检测微量样品中禽呼肠孤病毒δC和δNS基因表达的要求,具有快速、敏感性高、重复性好等特点.

关键词：禽呼肠孤病毒、δC基因、δNS基因、SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR、相对定量

所属期刊栏目：41

分类号：S852.65+9.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家百千万人才工程入选专项资金项目945200603;广西科学基金项目桂科自0991222;广西留学回国人员基金项目桂科回0832019,0639016

在线出版日期：2010-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：366-370