RNF43通过β-catenin抑制黑色素瘤细胞PD-L1表达并促进CD8 + T细胞介导的抗肿瘤免疫反应

摘要：

目的:探讨环指蛋白43（RNF43）对黑色素瘤中CD8
+ T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的调节作用。
方法:利用慢病毒感染技术对小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA进行RNF43基因过表达与敲低；通过小鼠皮下成瘤实验检测Lv-Ctrl-OE组、Lv-RNF43-OE组、Lv-Ctrl-KD组和Lv-RNF43-KD组小鼠黑色素瘤细胞株B16-OVA体内增殖情况，通过流式细胞术检测黑色素瘤肿瘤免疫微环境中CD8
+ T细胞穿孔素和γ干扰素（IFN-γ）的表达水平；采用实时荧光定量PCR实验检测细胞中β-catenin和程序性死亡受体配体1（PD-L1） mRNA的表达水平；通过双荧光素酶报告基因实验检测RNF43对PD-L1的转录调控作用。
结果:本研究成功构建RNF43稳定过表达与敲低的小鼠黑色素瘤细胞株Lv-RNF43-OE和Lv-RNF43-KD。小鼠皮下成瘤实验结果显示，Lv-RNF43-OE组瘤体质量为（0.08±0.06）g，明显小于Lv-Ctrl-OE组的（1.04±0.52）g，差异有统计学意义（
t=3.71，
P=0.032）；Lv-RNF43-KD组瘤体质量为（1.94±0.29）g，与Lv-Ctrl-KD组的（1.15±0.74）g相比差异无统计学意义（
t=-1.70，
P=0.164）。流式细胞术结果显示，Lv-RNF43-OE组CD8
+ T细胞穿孔素荧光强度为9 034±2 628，明显高于Lv-Ctrl-OE组的3 847 ±1 637，差异有统计学意义（
t=-3.35，
P=0.015）；Lv-RNF43-KD组CD8
+ T细胞穿孔素荧光强度为966±247，明显低于Lv-Ctrl-KD组的2 226±646，差异有统计学意义（
t=3.16，
P=0.034）；Lv-RNF43-OE组CD8
+ T细胞IFN-γ荧光强度为2 422±429，明显高于Lv-Ctrl-OE组的1 688±324，差异有统计学意义（
t=-2.73，
P=0.034）；Lv-RNF43-KD组CD8
+T细胞IFN-γ荧光强度为614（454，863），与Lv-Ctrl-KD组的1 159（1 152，2 068）相比差异有统计学意义（
Z=-1.96，
P=0.050）。实时荧光定量PCR实验结果显示，Lv-RNF43-OE组β-catenin mRNA相对表达量为0.67±0.16，明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.11，差异有统计学意义（
t=2.98，
P=0.041）；Lv-RNF43-OE组PD-L1 mRNA相对表达量为0.32±0.09，明显低于Lv-Ctrl-OE组的1.00±0.09，差异有统计学意义（
t=9.13，
P=0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，pCMV6-NC组、RNF43组、RNF43+β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性分别为1.00±0.00、0.84±0.00、1.49±0.00和1.57±0.03（
F=2 218.33，
P<0.001），进一步两两比较发现，与pCMV6-NC组相比，RNF43组PD-L1启动子荧光素酶活性明显降低（
P<0.001），RNF43+β-catenin组和β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高（
P<0.001；
P=0.003）；与RNF43组相比，RNF43+β-catenin组PD-L1启动子荧光素酶活性明显升高（
P<0.001）。
结论:RNF43可能通过抑制β-catenin的表达降低黑色素瘤中PD-L1 mRNA的表达并促进CD8
+ T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。

关键词：黑色素瘤、β连环素、环指蛋白43、程序性死亡受体配体1

所属期刊栏目：50

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：407-412