miR-219a-5p通过负调控HMGA2抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移

摘要：

目的:研究miR-219a-5p通过调控高迁移率蛋白A2（HMGA2）对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时定量PCR检测骨肉瘤U2OS细胞和正常成骨细胞hFOB1.19的miR-219a-5p mRNA表达水平。采用脂质体转染法将miR-219a-5p模拟物miR-219a-5p mimic（miR-219a-5p mimic组）以及阴性对照mimic NC（mimic NC组）转染U2OS细胞，通过实时定量PCR检测转染后细胞miR-219a-5p和HMGA2 mRNA的表达水平，蛋白质印迹法检测HMGA2蛋白水平，采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力，利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-219a-5p与HMGA2间的作用关系。结果:实时定量PCR结果显示，骨肉瘤U2OS细胞中的miR-219a-5p表达水平（0.11±0.01）显著低于正常成骨细胞（1.00±0.06），差异具有统计学意义（
t=26.83，
P<0.001）。CCK-8法结果显示，mimic NC组和miR-219a-5p mimic组培养24 h后细胞吸光度值分别为0.52±0.02、0.42±0.02，48 h后分别为0.85±0.03、0.60±0.03，72 h后分别为1.12±0.02、0.72±0.02，miR-219a-5p mimic组细胞增殖活性显著低于mimic NC组，差异均具有统计学意义（
t=6.97，
P<0.001；
t=16.65，
P<0.001；
t=26.78，
P<0.001）。克隆形成实验结果显示，miR-219a-5p mimic组细胞克隆数为（157.00±15.39）个，明显低于mimic NC组的（294.00±15.51）个，差异具有统计学意义（
t=9.70，
P<0.001）。划痕实验结果显示，培养24 h后，miR-219a-5p mimic组细胞划痕面积百分比为（40.53±2.92）%，显著高于mimic NC组的（21.71±3.11）%，差异具有统计学意义（
t=7.26，
P=0.002）。Transwell小室侵袭实验结果显示，miR-219a-5p mimic组细胞的穿膜数量为（128.67±18.67）个，显著少于mimic NC组的（317.67±14.33）个，差异具有统计学意义（
t=15.65，
P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，在含有MUT-HMGA2细胞中，与mimic NC组（4.40±0.28）相比，转染miR-219a-5p mimic（4.30±0.26）对荧光素酶活性无明显影响，差异无统计学意义（
t=0.85，
P=0.690）。在含有WT-HMGA2细胞中，相比于NC mimic组（4.50±0.25），miR-219a-5p mimic组（2.88±0.16）荧光素酶活性显著降低，差异具有统计学意义（
t=19.15，
P<0.001）。且过表达miR-219a-5p后，骨肉瘤U2OS细胞中的HMGA2 mRNA和蛋白表达（0.77±0.01；0.37±0.01）相比于mimic NC组（1.00±0.02；1.00±0.01）均下调，差异均具有统计学意义（
t=16.38，
P<0.001；
t=42.02，
P<0.001）。
结论:在骨肉瘤细胞中，miR-219a-5p可通过下调HMGA2的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：骨肉瘤、微RNAs、HMGA2蛋白、细胞增殖

所属期刊栏目：49

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：193-198