BMXΔN通过ERK/MAPK信号通路影响肺癌细胞对吉非替尼的耐药性

摘要：

目的:探讨一种BMX可变剪切体BMXΔN参与肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼耐药的作用机制。方法:利用慢病毒感染携带EGFR突变的人肺癌细胞株PC9和HCC827构建BMXΔN稳转细胞株。实验分为PC9-Vec组(阴性对照转染空载体PC9细胞)、PC9-BMX组(稳定表达BMX的PC9细胞)、PC9-BMXΔN组(稳定表达BMXΔN的PC9细胞)以及HCC827-Vec组(阴性对照转染空载体HCC827细胞)、HCC827-BMXΔN组(稳定表达BMXΔN的HCC827细胞)。采用实时定量PCR检测细胞中mRNA表达水平；采用蛋白质印迹法检测细胞中蛋白表达水平；0 nmol/L、0.01 nmol/L、2.00 nmol/L、50.00 nmol/L、100.00 nmol/L、200.00 nmol/L、2.00 μmol/L、4.00 μmol/L吉非替尼处理PC9-Vec组和PC9-BMXΔN组细胞，0 nmol/L、0.01 nmol/L、1.00 nmol/L、10.00 nmol/L、100.00 nmol/L、1.00 μmol/L吉非替尼处理HCC827-Vec组和HCC827-BMXΔN组细胞，采用MTT法检测细胞活力。结果:PC9-BMXΔN组细胞散落并呈现成纤维样形态。与PC9-Vec组细胞相比，PC9-BMXΔN组细胞中纤连蛋白、神经钙黏素、波形蛋白、Snail、Slug和TWIST 2的mRNA表达均上调。与PC9-Vec组和PC9-BMX组细胞相比，PC9-BMXΔN组细胞中纤连蛋白和波形蛋白表达均上调，上皮钙黏素的表达下调。与PC9-Vec组细胞相比，经0.01 nmol/L[(99.11±2.16)%
vs. (91.29±1.91)%，
t＝-4.701，
P＝0.011]、2.00 nmol/L[(80.41±1.48 )%
vs. (63.36±2.14)%，
t＝-11.324，
P<0.001]、50.00 nmol/L[(80.83±5.38)%
vs. (60.22±3.61)%，
t＝-5.507，
P＝0.005]、100.00 nmol/L[(75.54±3.46)%
vs. (59.93±1.91)%，
t＝-6.836，
P＝0.002]、200.00 nmol/L[(77.57±6.53)%
vs. (56.70±2.88)%，
t＝-5.064，
P＝0.007]、2.00 μmol/L[(70.22±3.45)%
vs. (53.14±0.89)%，
t＝-8.309，
P＝0.001]、4.00 μmol/L[(68.66±4.67)%
vs. (52.30±2.59)%，
t＝-4.882，
P＝0.008]浓度吉非替尼处理的PC9-BMXΔN组细胞活力均显著升高，差异均有统计学意义；与HCC827-Vec组相比，经1.00 nmol/L[(64.36±2.49 )%
vs. (47.13±4.21 )%，
t＝-7.067，
P＝0.019]、10.00 nmol/L[(63.25±5.87 )%
vs. (43.28±2.95)%，
t＝-5.267，
P＝0.006]、100.00 nmol/L[(49.47±5.74)%
vs. (37.12±4.92)%，
t＝-2.830，
P＝0.047]、1.00 μmol/L[(49.05±3.34)%
vs. (32.06±4.73)%，
t＝-5.073，
P＝0.007]吉非替尼处理的HCC827-BMXΔN组细胞活力均显著升高，差异均具有统计学意义。吉非替尼处理明显抑制了PC9-Vec组、PC9-BXM组和PC9-BMXΔN组细胞中p-EGFR和p-ERK1/2的表达；与PC9-Vec组(0.81±0.04)和PC9-BXM组(0.80±0.05)相比，PC9-BMXΔN组细胞p-EGFR的表达水平经吉非替尼处理8 h后(0.91±0.04)显著升高(均
P<0.05)；p-ERK1/2的表达经吉非替尼处理2 h后(0.64±0.06
vs. 0.38±0.12
vs. 0.37±0.14)、4 h(1.28±0.06
vs. 1.08±0.06
vs. 1.11±0.07)、8 h(0.75±0.04
vs. 0.55±0.05
vs. 0.60±0.07)均显著升高，差异均具有统计学意义(均
P<0.05)。
结论:BMXΔN参与了肺癌EGFR-TKI吉非替尼耐药，可能是通过诱导细胞发生上皮间质转化和激活ERK/MAPK通路实现的。

关键词：肺肿瘤、细胞增殖、BMXΔN、吉非替尼耐药、上皮间质转化

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资助基金：山东省重点研发计划2019GSF108185;Key Research and Development Program of Shandong Province of China2019GSF108185

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：328-334