微小RNA-424-5p调控OTX1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：

目的 研究结直肠癌组织中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与orthodenticle人同源盒基因1(OTX1) mRNA表达的关系,并探讨miR-424-5p对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 收集2017年6月至2018年6月在昆明医科大学第三附属医院结直肠外科收治的60例结直肠癌患者,采用实时定量PCR (RT-qPCR)检测miR-424-5p和OTX1 mRNA在60对结直肠癌组织和癌旁组织以及结直肠癌HCT116细胞中的表达情况,并分析两者表达的相关性.HCT116细胞分别转染miR-NC(miR-NC组)和miR-424-5 p-mimic(miR-424-5p-mimic组),采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测miR-424-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测过表达miR-424-5p对OTX1蛋白表达的影响.荧光素酶报告实验检测miR-424-5p对OTX1-3'UTR报告载体荧光素酶活性的影响.结果 OTX1 mRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为1.049±0.446和0.639±0.178(t=-6.583,P＜0.001);miR-424-5p在结直肠癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为0.865±0.261和1.329±0.387(t=7.705,P＜0.001),差异均有统计学意义.结直肠癌组织中miR-424-5p和OTX1 mRNA的表达呈负相关(r=-0.439,P=0.015).HCT116细胞转染miR-424-5p-mimic后第72、96和120 h时吸光度(A)值分别为0.813 ±0.064、0.960±0.098、1.287±0.192,转染miR-NC后第72、96和120 h时A值分别为1.163 ±0.158、1.645 ±0.117、2.043±0.236,miR-424-5p-mimic组细胞增殖能力显著低于miR-NC组,差异均具有统计学意义(t=3.538,P=0.024;t=7.778,P=0.001;t=4.257,P=0.013).划痕实验结果显示,划痕24 h后miR-424-5p-mimic组与miR-NC组相比迁移能力显著减弱.miR-NC组和miR-424-5p-mimic组穿膜细胞数分别为(177.104±17.834)个和(35.667±13.634)个,差异有统计学意义(t=15.246,P＜0.001).OTX1蛋白在miR-NC组和miR-424-5p-mimic组中的相对表达量分别为0.862 ±0.121、0.342±0.103,差异有统计学意义(t=16.286,P＜0.001).荧光素酶实验结果显示,过表达miR-424-5p后,wt-OTX1-3'UTR和mut-OTX1-3'UTR报告载体的荧光素酶活性分别为0.305±0.095和0.898±0.080,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 miR-424-5p与OTX1mRNA在结直肠癌组织中的表达呈负相关,miR-424-5p可通过下调OTX1的表达抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

关键词：结直肠肿瘤、微RNAs、细胞增殖、OTX1

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资助基金：云南省科技计划2017FE467 -072;云南省卫生科技计划2016NS101Science and Technology Project of Yunnan Province of China2017FE467 -072;Health Science and Technology Project of Yunnan Province of China2016NS101

在线出版日期：2019-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：321-326