质膜型唾液酸酶NEU3活性对骨肉瘤MG-63细胞增殖与凋亡的影响

摘要：

目的 探讨质膜型唾液酸酶(NEU3)活性对骨肉瘤MG-63细胞在体外增殖及凋亡的调控作用.方法 体外培养MG-63细胞,以抗NEU3抗体免疫荧光染色,显示NEU3在MG-63细胞中的定位;以0 nmol/L唾液酸酶活性抑制剂(DANA)处理组或0μg/ml抗NEU3抗体处理组为空白对照组,以10、20、50 nmol/L DANA或0.5、1.0、2.0μg/ml抗NEU3抗体处理24 h或48 h后,采用CCK-8比色法、流式细胞术分别检测细胞增殖抑制率和细胞凋亡率,Western blotting法检测癌基因相关蛋白Ras蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平.结果 免疫荧光染色结果显示,NEU3表达定位于MG-63细胞质中.作用48 h后,0、10、20、50 nmol/L DANA处理组细胞增殖抑制率分别为0、15.10％ ±3.23％ 、41.46％ ±2.31％ 、64.68％ ±4.12％,差异具有统计学意义(F=99.90,P<0.001),不同DANA浓度组间两两比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05);0、0.5、1.0、2.0μg/ml抗NEU3抗体封闭处理48 h后,MG-63细胞增殖抑制率分别为0、9.34％ ±1.53％ 、19.66％ ±4.18％ 、42.50％ ±5.68％,差异具有统计学意义(F=25.67,P<0.001),不同抗体浓度组间两两比较,除0.5μg/ml与1.0μg/ml组比较差异无统计学意义外(P>0.05),其余组间差异均具有统计学意义(均P<0.05).采用不同浓度DANA(0、10、20、50 nmol/L)处理MG-63细胞24 h后,凋亡率分别为4.05％ ±0.07％ 、4.15％ ±0.23％ 、12.85％ ±1.48％ 、8.29％ ±0.86％,组间差异具有统计学意义(F=23.21,P<0.001),不同DANA浓度组间两两比较,除0 nmol/L与10 nmol/L、20 nmol/L与50 nmol/L处理组间差异无统计学意义外(P>0.05),其余组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05);以不同浓度NEU3抗体(0、0.5、1.0、2.0μg/ml)处理MG-63细胞24 h后,细胞凋亡率分别为4.05％ ±0.07％ 、20.13％ ±2.97％ 、20.29％ ±2.82％ 、20.58％ ±0.70％,组间差异有统计学意义(F=15.36,P=0.001),不同抗体浓度组间两两比较,0μg/ml与各处理组间差异有统计学意义(均P<0.05),而各处理组间差异无统计学意义(P>0.05).Western blotting结果显示随DANA和NEU3抗体浓度升高,Bcl-2蛋白和Ras蛋白的表达逐渐降低.结论 抑制NEU3酶活性可抑制骨肉瘤细胞MG-63的存活,促进该细胞的凋亡,其作用机制可能是通过下调癌基因相关蛋白Ras和Bcl-2的表达实现的,提示NEU3可能是治疗骨肉瘤的潜在药物靶点.

关键词：神经氨酸酶、骨肉瘤、细胞增殖、细胞凋亡、MG-63细胞

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资助基金：四川省科技计划项目2019YFS0318;四川省卫生和计划生育委员会课题16PJ434Science and Technology Planning Project of Sichuan Province of China2019YFS0318;Health and Family Planning Commission of Sichuan Province of China16PJ434

在线出版日期：2019-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：193-198