过表达miR-613通过靶向下调Wee1提高结直肠癌细胞放疗敏感性的机制研究

摘要：

目的 研究微小RNA-613(miR-613)/Wee1分子轴影响结直肠癌细胞放疗敏感性的分子机制.方法 选取2016年11月至2017年5月昆明医科大学附属延安医院收治的放疗敏感结直肠癌患者20例、放疗抵抗患者20例,另选取人结直肠癌细胞株LoVo、HCT116,并建立放疗抵抗细胞株LoVo/R、HCT116/R,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-613和Wee1在结直肠癌组织和细胞株中的表达情况.在结直肠癌放疗抵抗细胞中转染miR-613 mimic,未转染细胞为对照组,采用CCK-8、Transwell和Western blotting方法检测在不同放疗剂量下,过表达miR-613对细胞增殖活力、侵袭能力和细胞周期的影响.进一步实验,采用双荧光素酶报告基因验证miR-613与Wee1的靶向关系.在结直肠癌放疗抵抗细胞中转染si-Wee1或同时转染si-Wee1和miR-613 inhibitor,未转染细胞为对照组,采用CCK-8、Transwell和Western blotting方法检测在不同放疗剂量下,miR-613/Wee1分子轴对细胞增殖活力、侵袭能力和细胞周期的影响.结果 miR-613在放疗抵抗结直肠癌患者组织中的表达量低于放疗敏感患者(1.54±0.25:2.64±0.45;t=3.140,P=0.009),其在放疗抵抗结直肠癌细胞株中低表达(LoVo/R:LoVo为1.03±0.12:3.05 ±0.15,t =8.944,P =0.006;HCT116/R:HCT116为1.01 ±0.11:2.85±0.16,t=8.050,P=0.008).同时,与对照组相比,过表达miR-613显著抑制结直肠癌放疗抵抗LoVo/R和HCT116/R细胞增殖(LoVo/R细胞:t6Gy=6.018,P=0.013;HCT116/R细胞:t6Gy=5.634,P=0.015),抑制细胞侵袭(LoVo/R细胞:45.00±8.95∶180.15±6.95,t6 Gy=11.93,P=0.003;HCT116/R细胞:49.97±6.21∶170.20±7.03,t6 Gy=12.82,P=0.006),并下调G2-M期相关蛋白细胞周期蛋白依懒性激酶1(CDK1)和cyclin B的表达水平.此外,双荧光素酶报告基因证实miR-613靶向作用于Wee1.进一步实验发现,miR-613通过靶向下调Wee1显著抑制LoVo/R和HCT116/R细胞增殖(转染si-Wee1、同时转染si-Wee1和miR-613 inhibitor以及对照组3组比较,LoVo/R细胞:F8Gy=40.742,P=0.007;HCT116/R细胞:F8Gy=28.958,P=0.011),抑制细胞侵袭(LoVo/R细胞:F8Gy=55.413,P=0.004;HCT116/R细胞:F8Gy=65.634,P=0.003),并将细胞阻滞在G2-M期,进而上调LoVo/R和HCT116/R细胞对放疗的敏感性.结论 miR-613/Wee1分子轴与结直肠癌细胞放疗抵抗性存在调控关系,且过表达miR-613可逆转结直肠癌细胞的放疗抵抗性.

关键词：微RNAs、结直肠肿瘤、Wee1、放疗敏感性

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资助基金：云南省科技厅-昆明医科大学基础研究联合专项资金2015fb088Joint Special Fund for Basic Research of Yunnan Provincial Department of Science and Technology and Kunming Medical University 2015fb088

在线出版日期：2019-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：157-165