靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的 研究靶向沉默Notch1基因对人非小细胞肺癌干细胞增殖和凋亡的影响.方法 选取人肺癌A549细胞和SPC-A-1细胞,分为空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组,Nc-shRNA组为阴性对照RNAi慢病毒组,Notch1-shRNA组为Notch1抑制RNAi慢病毒组.采用慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默Notch1基因,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting验证Notch1基因的沉默效果;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和成球实验检测细胞增殖能力;采用Annexin V/7-AAD双染法检测细胞凋亡情况;采用Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)以及Notch1下游基因Hes-1的表达情况.结果 qRT-PCR结果显示A549细胞和SPC-A-1细胞中空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组Notch1相对表达量分别为1.000±0.000、0.937±0.025、0.490±0.036和1.000±0.000、1.077±0.070、0.373±0.038,差异均具有统计学意义(F=359.707,P＜0.001;F=210.455,P＜0.001),进一步两两比较,两种细胞中Notch1-shRNA组Notch1相对表达量明显低于Nc-shRNA组(均P＜0.05);Western blotting检测A549细胞和SPC-A-1细胞中Notch1蛋白表达的结果与mRNA结果一致.MTT实验显示A549细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在24hA值分别为0.209±0.005、0.219 ±0.009、0.159±0.006,48 hA值分别为0.293±0.004、0.302±0.004、0.205±0.005,72 h A值分别为0.450±0.003、0.430±0.012、0.348±0.017,差异均具有统计学意义(F=79.487,P＜0.001;F=508.664,P＜0.001;F=57.156,P＜0.001),进一步两两比较,24、48、72 hNotch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P＜0.05);SPC-A-1细胞球空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组在48 hA值为0.438±0.022、0.412±0.015、0.364±0.010,72 hA值为0.540±0.016、0.519 ±0.009、0.438±0.019,差异均具有统计学意义(F=15.667,P=0.004;F=37.299,P＜0.001),进一步两两比较,48、72 h Notch1-shRNA组增殖能力明显低于Nc-shRNA组(均P＜0.05).空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组A549细胞成球直径分别为(149.667±6.506) μm、(136.667±7.095) μm、(86.676±7.638) μm,差异具有统计学意义(F=65.940,P＜0.001);SPC-A-1细胞成球直径分别为(118.667±6.658) μm、(128.000±7.000) μm、(60.675±4.509) μm,差异具有统计学意义(F=105.372,P＜0.001);进一步两两比较,两种细胞Notch1-shRNA组成球大小明显小于Nc-shRNA组,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).流式细胞术检测A549细胞和SPC-A-1细胞空白对照组、Nc-shRNA组、Notch1-shRNA组凋亡率分别为(0.489±0.014)％、(0.633±0.021)％、(1.683±0.221)％和(1.323±0.194)％、(1.690±0.188)％、(3.017±0.356)％,差异均具有统计学意义(F=77.660,P＜0.001;F=32.200,P=0.001),进一步两两比较,两种细胞中Notch1-shRNA组凋亡率明显高于Nc-shRNA组(均P＜0.05).Western blotting显示A549细胞空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组3组间PCNA、Bcl-2、Hes-1表达差异均具有统计学意义(F=155.343,P＜0.001;F=22.576,P=0.002;F=70.108,P＜0.001),SPC-A-1细胞空白对照组、Nc-shRNA组和Notch1-shRNA组3组间PCNA、Bcl-2、Hes-1表达差异均具有统计学意义(F =49.419,P＜0.001;F=28.090,P=0.001;F=12.040,P=0.007),进一步两两比较,两种细胞PCNA、Bcl-2、Hes-1表达在Notch1-shRNA组明显低于Nc-shRNA组,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 靶向沉默Notch1能降低肺癌干细胞增殖活性,促进其凋亡,可能与其下游基因Hes-1下调有关.

关键词：受体、Notch1、肿瘤干细胞、癌、非小细胞肺、细胞增殖、细胞凋亡

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在线出版日期：2019-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：65-71