miR-1280通过激活p21基因的表达对膀胱癌细胞周期及增殖的影响

摘要：

目的 探讨微小RNA-1280(miR-1280)对膀胱癌细胞株BIU-87细胞p21基因表达的激活作用及对膀胱癌细胞周期及增殖的影响.方法 实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达水平.选取表达量最低的膀胱癌细胞,分别转染miR-1280模拟物(实验组)和miR-NC(对照组),qRT-PCR检测两组细胞中miR-1280和p21 mRNA表达水平.染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证miR-1280与p21基因启动子的靶向作用.Western blotting分别检测两组细胞中p21、细胞周期依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白A2(Cyclin A2) mRNA和蛋白的表达.流式细胞术检测细胞周期.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力.结果 qRT-PCR结果提示,膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达分别为0.503±0.094、0.611±0.054、0.567±0.077、0.257±0.032和1.014±0.090,差异有统计学意义(F=1.880,P＜0.001).与膀胱癌细胞株T24、5637、J82相比,BIU-87细胞株中的miR-1280表达量最低(P =0.026,P=0.003,P=0.008).与对照组相比,实验组BIU-87细胞中miR-1280表达显著升高(1041.000±157.500∶1.023±0.118,t=6.606,P＜0.001),p21 mRNA表达亦显著升高(5.280±0.660∶1.007±0.070,=6.440,P＜0.001).Western blotting结果显示P21蛋白表达上调,CDK1和Cyclin A2蛋白表达下调.ChIP实验结果显示,相比miR-NC转染组,生物素修饰的miR-1280在p21基因启动子区域的富集倍数显著增加(1.246±0.171∶0.519±0.087,t=3.787,P=0.009).实验组BIU-87细胞G0-G1期细胞比例较对照组明显升高(68.360％±3.064％∶46.970％±3.971％,t=4.263,P=0.005).MTT结果显示,与对照组相比,转染miR-1280后的BIU-87细胞从第3天(0.826±0.099∶1.224±0.057,t=3.505,P=0.013)开始增殖能力明显降低.结论 miR-1280可通过结合p21基因启动子区域,激活膀胱癌细胞BIU-87中p21基因的表达,从而阻滞细胞周期的进展,抑制细胞的增殖,为膀胱癌的靶向治疗提供了一个新靶点.

关键词：微RNAs、膀胱肿瘤、原癌基因蛋白质p21(ras)、RNA激活

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在线出版日期：2018-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：134-138