AMPK过表达慢病毒载体的构建及稳定转染肺癌A549细胞株的建立

摘要：

目的 通过构建表达载体,建立稳定转染腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的肺癌A549细胞株,观察过表达AMPK后对A549细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 扩增AMPK全长序列,双酶切目的基因并插入GV358载体,共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集慢病毒上清液后感染A549细胞,建立稳定过表达AMPK的A549细胞株.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测AMPK的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)及Transwell法检测A549细胞增殖、侵袭能力的变化.结果 经限制内切酶鉴定及测序分析,成功构建了GV358-AMPK慢病毒表达载体质粒.与转染空载体相比,转染GV358慢病毒载体的A549细胞AMPK蛋白表达升高5.87倍(P=0.002),mRNA水平升高16.12倍(P ＜0.001);A549细胞过表达AMPK后,第4～5天细胞增殖活性显著降低(第4天:0.53±0.03∶0.64±0.05,P=0.021;第5天:0.58±0.04:0.80±0.07,P=0.002),侵袭能力显著减弱[(1.6±0.5) ×105∶(3.4±0.3) ×105,P =0.004].结论 成功构建了AMPK慢病毒表达载体和稳定表达A549细胞株,过表达AMPK可抑制A549细胞增殖及侵袭能力.

关键词：癌、非小细胞肺、慢病毒属、细胞增殖、腺苷酸活化蛋白激酶

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资助基金：国家自然科学基金81441069National Natural Science Foundation of China 81441069

在线出版日期：2018-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：721-726