Mfn-2基因对人乳腺癌T47D细胞光动力疗法敏感性的影响及其作用机制

摘要：

目的 探讨过表达Mfn-2基因对人乳腺癌T47D细胞光动力疗法(PDT)敏感性的影响及其可能机制.方法 转染pEGFP和pEGFP-Mfn-2至T47D细胞,实时定量PCR (RT-PCR)和Western blotting分别检测人乳腺癌T47D细胞中pEGFP组和pEGFP-Mfn-2组Mfn-2 mRNA和Mfn-2蛋白的表达;pEGFP组、pEGFP-Mfn-2组转染T47D细胞48 h后,四甲基偶氮唑蓝(iTT)法检测细胞对PDT的敏感性;PDT照射转染了T47D细胞的pEGFP及pEGFP-Mfn-2,得到pEGFP+ PDT组和pEGFP-Mfn-2+ PDT组.流式细胞术检测pEGFP+ PDT组、pEGFP-Mfn-2+ PDT组T47D细胞凋亡及线粒体膜电位变化情况;激光共聚焦显微镜观察pEGFP组、pEGFP-Mfn-2组、pEGFP+ PDT组、pEGFP-Mfn-2+ PDT组线粒体超微形态结构.结果 RT-PCR结果显示,转染pEGFP后T47D细胞中Mfn-2 mRNA的表达量为1.01±0.12,转染pEGFP-Mfn-2后T47D细胞中Mfn-2 mRNA的表达量为1 067.00±41.72,差异有统计学意义(t=67.541,P＜0.001).Western blotting检测结果显示,与转染pEGFP相比,转染pEGFP-Mfn-2可明显提高T47D细胞中Mfn-2蛋白的表达.MTT分析结果显示,与转染pEGFP相比,pEGFP-Mfn-2转染可明显提高T47D细胞对PDT的敏感性,差异有统计学意义,如亚甲蓝为5.00 μmol/ml时,pEGFP+ PDT组和pEGFP-Mfn-2+ PDT组乳腺癌T47D细胞生存率分别为59.96％±1.21％、46.50％±1.72％(t=34.403,P ＜0.001).流式细胞术检测结果显示,与pEGFP+ PDT组相比,pEGFP-Mfn-2+ PDT组细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义[(81.21±2.13)％∶(68.82±2.64)％,P =0.024].与pEGFP+ PDT相比,pEGFP-Mfn-2+ PDT组线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义[(1.37±0.12)％∶(23.33±1.86)％,P＜0.001].激光共聚焦显微镜显示,pEGFP组细胞呈网状,pEGFP-Mfn-2组和pEGFP+ PDT组可导致线粒体融合,而pEGFP-Mfn-2+PDT组可导致线粒体崩解,完全失去其形态结构.结论 Mfn-2基因可能增强T47D细胞对PDT治疗的敏感性,其机制可能与改变线粒体形态结构,诱导线粒体途径凋亡有关.

关键词：乳腺肿瘤、基因、线粒体、光化学疗法、药理作用分子作用机制

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在线出版日期：2018-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：641-646