多聚肌苷酸-多聚胞苷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

摘要：

目的 研究多聚肌苷酸-多聚胞苷酸[Poly(I:C)]对肺腺癌A549细胞活力的影响,探讨Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡机制.方法 用Poly(I:C)和脂质体3000转染A549细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting用于检测凋亡相关蛋白、实时定量PCR检测细胞因子β干扰素(IFN-β)、趋化因子-10(CXCL-10)的表达.使用pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK和caspase-8特异性抑制剂Z-IETD-FMK抑制凋亡蛋白后,观察Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡的变化.RNA干扰实验敲低黑色素瘤分化相关抗原5(MDA5)、维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)的表达,进行上述指标的检测.结果 200 ng/ml Poly(I:C)转染后,肺腺癌A549细胞的存活率为74.92％±6.24％,较转染前(95.32％±3.05％)降低(t=2.883,P=0.041).100、200、400 ng/ml的Poly(I:C)诱导A549细胞凋亡率分别为9.97％±0.88％、23.63％±1.41％、32.57％-±2.39％,与对照组(0.74％±0.15％)相比,差异均有统计学意义(t =4.489,P=0.002;t=11.616,P=0.000;t=16.932,P=0.000).此外,死亡受体途径蛋白如TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-3明显升高,同时MDA5/RIG-Ⅰ通路激活以及1FN-β、CXCL-10的表达上调.pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK、caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK使细胞凋亡率分别降至3.17％±0.66％、5.35％±0.64％,与不加抑制剂(15.87％ ±0.93％)相比,差异有统计学意义(t=8.643,P=0.001;=6.824,P=0.002).RIG-Ⅰ、MDA5敲低后,Poly(I:C)诱导的TRAIL、IFN-β、CXCL-10表达下调.结论 Poly(I:C)能降低A549细胞的存活率,通过激活死亡受体途径诱导A549细胞的凋亡,并且MDA5/RIG-Ⅰ可能参与了该凋亡途径,此过程可能与IFN-β、CXCL-10有关.

关键词：肺肿瘤、细胞凋亡、多聚肌苷酸-多聚胞苷酸

所属期刊栏目：44

分类号：S85;R97

资助基金：北京市自然科学基金7151011;Beijing Municipal Natural Science Foundation of China7151011

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：321-326