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10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2016.07.007

HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究

引用
目的:检测HERG(human ether-à-go-go-related gene)钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探索小干扰 RNA(siRNA)沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为:HERG-siRNA 处理为实验组,control-siRNA 处理为对照组,未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示,实验组[(75.34±4.45)%]与对照组[(100.60±5.31)%]和空白组[(100.00±5.66)%]的细胞增殖水平相比,差异有统计学意义(t =3.64,P =0.007;t =3.43,P =0.009)。克隆形成结果示,实验组(134.30±11.82)与对照组(225.30±11.56)和空白组(232.80±12.21)的克隆形成数相比,差异有统计学意义(t =5.51,P =0.002;t =5.80,P =0.001)。流式细胞凋亡结果示,实验组[(28.10±2.21)%]与对照组[(9.36±2.42)%]和空白组[(10.92±2.51)%]的早期凋亡所占比例相比,差异有统计学意义(t =5.72,P =0.005;t =5.14,P =0.007)。Tunel 法结果示,实验组[(31.57±2.08)%]与对照组[(10.35±1.82)%]和空白组[(7.96±0.88)%]的凋亡指数相比,差异有统计学意义(t =7.69,P =0.002;t =10.48,P =0.001)。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1(cIAP-1)、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、Bcl-2和 Survivin 的活性,同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白(IκB)α和 NF-κB p65的表达水平。结论HERG 在骨肉瘤中高表达,其通过调控 NF-κB 信号通路参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡过程,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。

钾通道、骨肉瘤、细胞增殖、细胞凋亡、NF-κB

43

R73;H31

国家自然科学基金81402217Fund programNational Natural Science Foundation of China 81402217

2016-07-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共7页

508-514

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1673-422X

37-1439/R

43

2016,43(7)

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