UBE2D3基因过表达对食管癌细胞迁移增殖及顺铂敏感性的影响

摘要：

目的 构建过表达人泛素交联酶UBE2D3基因的稳定转染食管癌EC109细胞株,并观察过表达后迁移增殖能力及对顺铂化疗敏感性的改变.方法 食管癌EC109细胞株分别转染pEGFP-C1和pEGFP-UBE2D3质粒后,分为阴性对照组(NC组)和过表达组(OE组),并用G418进行筛选构建稳定转染细胞株.通过实时定量PCR(RT-PCR)法及Western blotting验证过表达效率,用划痕试验检测迁移能力,并用CCK-8法检测细胞增殖,半抑制浓度(IC50)法评价对顺铂的敏感性.结果 相对于亲本细胞,NC组UBE2D3 mRNA表达量为1.010±0.590,OE组为2.026±0.898;NC组UBE2D3蛋白表达量为0.923 ±0.237,OE组为1.520±0.487;NC组UBE2D3 mRNA及蛋白表达水平与空白对照组亲本细胞EC109相近(t=1.005,P＞0.05;t=1.492,P＞0.05),OE组较亲本细胞组表达高(t=6.682,P＜0.05;t=9.150,P＜0.05).在12 h NC组的迁移距离为(0.161±0.062) mm,OE组为(0.052±0.007) mm(=4.370,P＜0.05);在24 h NC组的迁移距离为(0.309 ±0.071) mm,OE组为(0.074 ±0.012) mm(=3.644,P＜0.05);在12 h和24 h时OE组相对于NC组的迁移率分别为0.236±0.051和0.241±0.037,OE组迁移能力明显较NC组降低;在第1天时OE组相对于NC组的增殖率为0.713±0.220(t=13.466,P＜0.05),第2天为0.848±0.241(t =27.241,P＜0.05),第3天为0.742 ±0.233(t=15.107,P＜0.05).使用顺铂处理后,在第1天时OE组的IC50值相对于NC组为0.356±0.154(t =4.326,P＜0.05),第2天为0.445±0.098(t =5.870,P＜0.05),第3天为0.481±0.096(=5.009,P＜0.05),OE组IC50值明显低于NC组;给予5μg/ml顺铂处理后,在第1、2、3天时OE和NC组相对于未使用顺铂处理时的增殖效率均减慢,其中OE组相对于NC组的增殖率分别为0.606±0.283(t=8.872,P＜0.05)、0.759±0.089(t=16.771,P＜0.05)和0.569±0.574(t =7.885,P＜0.05),然而在第1、2、3天时OE组的存活率相对于NC组分别为0.831 ±0.323(t=24.226,P＜0.05)、0.875±0.102(t=33.541,P＜0.05)和0.853±0.359(t=28.187,P＜0.05),顺铂对OE组抑制效率较NC组增加.结论 食管癌细胞EC109中过表达UBE2D3基因,能够抑制其迁移、增殖,增强其对顺铂的敏感性.

关键词：食管肿瘤、细胞运动、细胞增殖、UBE2D3基因

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在线出版日期：2016-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：171-176