CRISPR/Cas系统对人宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制探讨

摘要：

目的 研究靶向于HPV16型的-E7(HPV16-E7)基因的成簇规律间隔短回文重复序列及其相关系统(CRISPR/Cas)对HPV16阳性宫颈癌细胞株SiHa增殖和凋亡的影响及其机制.方法 培养HPV16阳性的宫颈癌细胞株SiHa和HPV阴性的人胚肾上皮细胞株HEK293,分别将SiHa细胞和HEK293细胞分为3组:Cri组(按照1∶3的比例转染向导RNA与Cas9质粒)、C9组(只转染等量的Cas9质粒)和对照组(不处理).T7核酸内切酶Ⅰ法检测双链DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法评价细胞增殖,Western blotting检测E7和成视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)表达.结果 转染48 h后,SiHa细胞Cri组PCR产物被切开.SiHa细胞Cri组凋亡率为26.6％,明显高于对照组(2.6％,x2 =5.455,P=0.020)和C9组(3.1％,x2=6.279,P=0.012).HEK293细胞对照组、C9组和Cri组的凋亡率分别为7.4％、7.6％、7.9％,Cri组与对照组和C9组比较,差异均无统计学意义(2=0.032,P=0.858;x2 =0.034,P=0.853).转染72 h后,SiHa细胞Cri组增殖抑制率为29.4％,明显高于对照组(15.0％,x2=22.481,P=0.000)和C9组(18.0％,x2=24.879,P=0.000).Cri组HEK293细胞在72 h的增殖抑制率为3.2％,与C9组(2.2％,x2=2.857,P=0.091)和对照组(2.3％,x2=3.438,P=0.064)比较差异均无统计学意义.转染48 h后,与对照组相比,SiHa细胞Cri组E7蛋白表达明显下调,pRb蛋白表达明显上升,而C9组E7蛋白和pRb蛋白含量没有明显变化.结论 靶向HPV16-E7的CRISPR可以特异性地促进HPV16阳性的SiHa细胞凋亡、抑制细胞增殖.其机制可能是通过特异性地作用于HPV16-E7基因使其双链DNA断裂、功能破坏,同时上调抑癌蛋白pRb表达.

关键词：宫颈肿瘤、人乳头瘤病毒16、成簇规律间隔短回文重复序列及其相关系统

所属期刊栏目：42

分类号：R737.33;R285.5;R378.25

在线出版日期：2016-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：886-890