靶向survivin基因微小RNA真核表达载体的构建及其对人结肠癌细胞增殖的影响

摘要：

目的 构建靶向survivin基因的微小RNA(miRNA)真核表达载体,探讨其对人结肠癌细胞(HT-29)增殖、凋亡的影响.方法 设计合成针对survivin基因的miRNA序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/Em GFP-miR真核表达载体上,构建靶向survivin的miRNA重组质粒.HT-29细胞接种于6孔板,分为空白对照组、转染试剂组、空质粒组(阴性对照组)以及目的基因组(阳性对照组)4组.瞬时转染后收集各组细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞的增殖指数及凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法(Western blot)检测靶基因(survivin) mRNA和蛋白的表达.结果 HT-29细胞转染后,目的基因组增殖指数与正常组、转染试剂组、空质粒组相比明显降低(17.98％±2.35％ vs 38.04％±2.11％ vs36.73％ ±2.51％ vs36.57％±3.05％;t=20.05,P ＜0.01;t =18.75,P＜0.01;t=18.59,P＜0.01),凋亡率明显增高(19.54％±1.74％ vs 3.13％±0.29％ vs 3.70％ ±0.44％ vs 3.61％±0.50％; t=16.40,P＜0.01;t=15.84,P＜0.01;t=15.92,P＜0.01).目的基因组survivin mRNA与其他各组相比明显降低(=0.68,P＜0.01;=0.58,P＜0.01;t =0.61,P＜0.01),蛋白的表达亦明显降低(t=0.64,P＜0.01;t =0.62,P＜0.01;t =0.67,P＜0.01).结论 靶向沉默结肠癌HT-29细胞的survivin基因可以明显抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡.

关键词：微RNAs、结肠肿瘤、细胞增殖、Survivin

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在线出版日期：2015-02-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-26