不同链长6A型肺炎球菌荚膜多糖与多糖结合物的稳定性及小鼠免疫原性

摘要：

目的:研究不同链长的6A型肺炎球菌荚膜多糖(type 6A pneumococcal capsular poly-saccharide, Pn6A)稳定性差异及链长对结合物稳定性和免疫原性的影响。方法:采用高压均质机获得不同链长的Pn6A，并在1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐作用下与破伤风类毒素-己二酰肼衍生物形成共轭结合物。通过比较原始多糖、多糖降解物及结合物的核磁共振氢谱验证结构的正确性，通过硫酸蒽酮法和速率比浊法定量比较抗原性；通过高效液相-分子尺寸排阻层析-多角度激光散射仪比较不同链长多糖的稳定性；分析结合物物理化学(理化)性质，并通过重均相对分子质量(weight-average relative molecular weight, Mw)变化及游离多糖变化比较结合物稳定性；用原始多糖和结合物分别皮下免疫NIH小鼠3次，ELISA检测抗多糖IgG水平。结果:Pn6A经机械剪切3、8、20次后，Mw由14.01×10
5 g/mol分别下降为1.55×10
5、0.92×10
5和0.58×10
5 g/mol，其对应结合物理化数据相近；核磁共振结果表明，多糖降解物和结合物各特征质子的化学位移相比原始多糖未发生改变；硫酸蒽酮法和速率比浊法定量计算得到的不同多糖和结合物单位抗原值相近；在不同pH及温度条件下，长链多糖及其结合物的Mw和游离多糖变化均大于短链多糖。不同链长多糖结合物免疫小鼠后诱导的IgG抗体滴度均高于原始多糖(
F＝2.90,
P＝0.048)，而不同结合物之间的免疫原性差异无统计学意义(
F＝1.39，
P＝0.267)。
结论:机械剪切不会破坏Pn6A化学结构和抗原性；Pn6A链长越短，所获得的多糖及结合物越稳定；Pn6A经机械剪切后制备的结合物在小鼠体内可诱导良好的免疫应答。

关键词：6A型肺炎球菌荚膜多糖、核磁共振氢谱、破伤风类毒素、结合疫苗、免疫原性

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分类号：R392

资助基金：国家科技重大专项"重大新药创制"2018ZX09738006-005;National Science and Technology Major Project of China for "Major New Drug Innovation and Development"2018ZX09738006-005

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：127-133