新型冠状病毒Beta株灭活疫苗原液鉴别实验

摘要：

目的:建立特异性鉴别新型冠状病毒Beta株灭活疫苗原液的逆转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)并验证。方法:在新型冠状病毒Beta株刺突蛋白(spike，S)受体结合域(receptor binding domain，RBD)中3个特异性突变位点的上下游保守区域设计引物S3F/S3R，通过RT-PCR扩增843 bp目的DNA。对扩增产物进行测序，与原型株的
S基因序列进行对比，通过3个特征突变识别Beta株。对该方法的重复性、专属性、耐用性和灵敏度进行验证。
结果:该方法能准确扩增出843 bp目的DNA，经测序表明，扩增产物与新型冠状病毒Beta株基因序列一致，包含3个特征突变位点。取1批Beta株原液进行6次PCR，测序结果显示与Beta株核苷酸序列一致。S3F/S3R引物只对
S的RBD区域有扩增作用。Beta株原液4 ℃和－70 ℃放置8周，仍然可以扩增出目的条带，且测序结果正确。将原液提取RNA稀释成不同浓度后进行RT-PCR，得出最低检测限为0.032 ng/μl。
结论:建立的RT-PCR具有良好的专属性、重复性、耐用性和灵敏度，能成功区分新型冠状病毒原型株与Beta株，可用于新型冠状病毒疫苗生产中原液的鉴别。

关键词：新型冠状病毒Beta株、逆转录聚合酶链反应、鉴别

所属期刊栏目：46

分类号：Q503(一般性问题)

资助基金：国家重点研发计划2020YFC0842100;湖北省科技重大专项2021ACB005;National Key Research and Development Program2020YFC0842100;Science and Technology Major Project of Hubei Province2021ACB005

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：7-12