抗汉城病毒荧光单克隆抗体的制备及初步应用

摘要：

目的:制备抗汉城病毒(Seoul virus，SEOV)荧光单克隆抗体(单抗)，并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。方法:以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原，采用小鼠杂交瘤细胞融合技术，筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤；小鼠体内诱生法制备单抗腹水，蛋白A亲和层析纯化单抗，并以蛋白质印迹法鉴定其特异性；间接ELISA测定单抗效价和相对亲和力；纯化单抗采用搅拌法标记异硫氰酸荧光素，并分别采用直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法对Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行病毒灭活验证。结果:共筛选出4株特异性抗SEOV L-99株杂交瘤1D5、2E3、3A4及5B7。蛋白质印迹法鉴定4株单抗均与SEOV L-99株核衣壳蛋白发生特异性反应；间接ELISA测定腹水效价为3.13×10
－8~1.25×10
－7；相对亲和力顺序为1D5>3A4>2E3>5B7；纯化抗体纯度>95%；异硫氰酸荧光素标记1D5株单抗的结合比率为3.4；直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法检测盲传3代的Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液，病毒灭活验证结果一致。
结论:成功筛选到高效价特异性抗SEOV单抗，并制备成荧光单抗，可用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗生产工艺中的病毒灭活验证。

关键词：肾综合征出血热、汉城病毒、荧光单克隆抗体、灭活验证

所属期刊栏目：45

分类号：R392-33

资助基金：吉林省省级医药健康产业发展专项基金项目2017-0311010YY;Provincial Medical and Health Industy Development Special Fund Project of Jilin Province2017-0311010YY

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：181-186