表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

摘要：

目的:构建表达甲型H5N1禽流感病毒(H5N1 avian influenza A virus，H5N1 AIAV)NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒，为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法:通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)编码基因，并将改造的
HA、
NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株(vaccinia virus Tiantan，VTT)于Vero细胞中发生同源重组后，筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒(rVTT-HA/NA)，并对其进行鉴定。
结果:反转录PCR扩增的
HA和
NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp，与预期相同。DNA测序证实，改造的
HA和
NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明，
HA和
NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示，rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性，血凝滴度为1∶32。
结论:重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。

关键词：正黏病毒科、血凝素类，病毒、神经氨酸酶、痘苗病毒、疫苗，合成

所属期刊栏目：43

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：105-109