流感疫苗病毒株在MDCK细胞中的培养条件

摘要：

目的 研究4价流感疫苗所用病毒株在MDCK细胞中的扩增条件.方法 在6孔细胞培养板中以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(0.1000、0.0100、0.0010、0.0001)和对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)-胰蛋白酶(胰酶)浓度(0、2、4、8μg/ml)进行病毒接种和扩增,感染后72 h收获细胞上清液,检测病毒血凝素效价,确定病毒最佳扩增条件.随后,在搅拌瓶中进行MDCK细胞微载体悬浮培养,研究不同起始细胞接种密度(1.5×105、2.0×105、3.0×105个/ml)和微载体浓度(3、5、10 g/L)对MDCK细胞生长的影响,确定细胞最佳扩增条件.根据确定的最佳扩增条件,在搅拌瓶培养体系中扩增4种病毒.结果 6孔板中4种流感病毒的最佳接种条件分别是,A/Michigan/45/2015(H1N1)pdm09:MOI 0.0100、TPCK-胰酶浓度2μg/ml;A/Hongkong/4801/2014(H3N2):MOI 0.0100、TPCK-胰酶浓度4μg/ml;B/Brisbane/60/2008:MOI 0.0010、TPCK-胰酶浓度4μg/ml;B/Phuket/3073/2013:MOI 0.0100、TPCK-胰酶浓度4μg/ml.在搅拌瓶中以3.0×105个/ml初始细胞密度接种,3 g/L微载体浓度培养,MDCK细胞能够实现较好的扩增,最高密度可达2.1×106个/ml;搅拌瓶悬浮培养,以最佳接种条件接种后,4种病毒的血凝素效价为6.75～8.42 log2血凝素单位/50μl.结论 通过摸索病毒接种最佳MOI、TPCK-胰酶浓度及优化MDCK细胞微载体悬浮培养条件,能够在MDCK细胞微载体悬浮培养体系中有效扩增4价流感疫苗用病毒株,为后期工艺放大研究奠定基础.

关键词：流感疫苗、四价体、Madin-Darby犬肾细胞、微载体

所属期刊栏目：41

分类号：R392-33;S852.65;R512.4

在线出版日期：2019-01-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：261-265