无小鼠神经毒力的乙型脑炎病毒/登革病毒1型嵌合病毒的筛选与序列分析

摘要：

目的 采用蚀斑纯化法筛选对小鼠无神经毒力的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)/登革病毒(dengue virus,DENV)1型嵌合病毒(JD1)纯化株,分析影响JD1小鼠神经毒力的相关位点.方法 将JD1在乳地鼠肾细胞中进行3轮蚀斑纯化,检测JD1纯化株对小鼠的脑内神经毒力.然后提取无神经毒力纯化株的基因组RNA,用逆转录PCR分段扩增全基因组序列并进行序列测定.将测序结果分别与原DENV-1的前膜-包膜蛋白和JEV骨架病毒株SA-14-14-2的基因序列进行比对.选取2个无神经毒力纯化株进行小鼠免疫保护实验.采用单侧t检验对结果进行比较.结果 经过3轮蚀斑纯化后,获得大、中、小3种蚀斑形态的6个JD1纯化株.3个纯化株对小鼠无神经毒力,小鼠脑内注射后全部存活;1株神经毒力较弱,70％以上小鼠存活;2株具有强神经毒力,小鼠全部死亡.测序结果显示,对小鼠无神经毒力的3个纯化株存在2处相同的氨基酸突变.将其中2个纯化株JD1-PP-61和JD1-PP-31腹腔免疫小鼠后,再用1 000半数致死量DENV-1鼠脑适应株进行脑内攻击.JD1-PP-61能较好地保护小鼠抵抗病毒攻击,仅20.0％小鼠死亡(t=7.237,P＜0.001);JD1-PP-31保护效果稍弱,41.9％小鼠死亡(t=4.752,P＜0.01).结论 通过蚀斑纯化筛选出对小鼠无神经毒力的JD1纯化株,并发现了可能与神经毒力减弱相关的位点.

关键词：登革热病毒、脑炎病毒、日本、疫苗、减毒、蚀斑纯化、神经毒力

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资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2012AA02A401;National High-tech R&D Program of China 863 Program2012AA02A401

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：157-161