磁珠法结合定量PCR检测肠道病毒71型灭活疫苗中宿主细胞DNA残留量的验证及应用

摘要：

目的 对磁珠法结合定量PCR(quantitative PCR,qPCR)检测肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)(EV71疫苗)中宿主DNA残留量进行适用性验证及应用.方法 利用微磁珠与蛋白溶液中DNA的特异性结合,来提取样品中残留的宿主细胞DNA.将已知浓度的细胞DNA对照系列稀释后,作为标准品DNA与提取的DNA同时进行qPCR扩增.根据标准品DNA的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中残留DNA进行定量分析.结果 标准品检测范围在0.03～3 000.00 pg/反应.该方法的标准曲线决定系数≥0.980,扩增效率为90.0％～110.0％.质控样品回收率为50％～150％,相对标准偏差均小于30％.实验结果的各项参数均在要求范围内.结论 磁珠法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对EV71疫苗生产过程中的DNA残留量进行定量测定.该法适用于EV71疫苗中DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义.

关键词：定量聚合酶链反应、Vero细胞、DNA残留、磁珠法、宿主细胞

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资助基金："重大新药创制"科技重大专项2014ZX09102042-003;National Science and Technology Major Project for "Major New Drugs lnnovation and Development"2014ZX09102042-003

在线出版日期：2018-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：123-127