Sabin株脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法的建立及应用

摘要：

目的 建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine, sIPV) D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,用于sIPV的体外效力评价.方法 以纯化D抗原分别免疫西门塔尔牛和BALB/c小鼠,获得牛免疫血清和小鼠单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞株,以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备单抗腹水.牛血清和小鼠腹水分别经沉淀和亲和层析后得到纯化牛多克隆抗体(多抗)和小鼠单抗.以多抗为包被抗体、单抗为检测抗体进行配对筛选,建立D抗原定量检测的双抗体夹心 ELISA.对方法的线性、范围、特异性、准确度、精密度以及在sIPV制备过程中样品检测的适用性进行验证.结果 纯化多抗和单抗均具有中和抗体活性,纯度分别达到80％和90％以上.经抗体配对筛选,确定3H10、901、1H10作为检测抗体,分别用于I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA的建立.I、Ⅱ、Ⅲ型包被抗体的使用浓度分别为1:8 000、1:8 000,1 : 10 000, 3H10、901、1H10检测抗体的使用浓度分别为1 : 10 000,1 : 20 000,1 : 10 000.建立的I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测方法的检测范围分别为0.4～13.0、0.4～12.0和0.4～20.0 DU/ml,线性回归决定系数≥0.99.该法能特异性检出D抗原,与C抗原、不同型别D抗原以及生产过程中的其他物质无交叉反应.用该法对高、中、低浓度样品进行测定, I、Ⅱ、Ⅲ型测定值/理论值(×100％)分别为97％～111％、91％～104％和95％～102％、相对标准偏差分别≤7％、≤9％和≤10％;采用该法检测sIPV生产过程中的样品,显示出抗原纯化趋势.结论 建立了脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法,可有效用于sIPV的体外效力评价.

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗、灭活、酶联免疫吸附测定、D抗原、C抗原

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在线出版日期：2018-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：113-117