应用CRISPR/Cas9靶向细胞内整合的HPV E6、 E7基因治疗宫颈癌

摘要：

目的:通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的
E6、
E7致癌基因，探索预防和治疗宫颈癌的新方法。
方法:以SiHa细胞系为研究对象，设计靶向其内整合的HPV16
E6和
E7基因的小引导RNA(small guide RNA，sgRNA)，将其克隆入CRISPR/Cas9质粒，并应用其将
E6、
E7基因敲除，随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果，并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。
结果:设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒，经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后，可以引发靶点DNA的突变，致使
E6和
E7基因密码子改变，无法正确表达。
E6、
E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降(
t检验，pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比，
P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比，
P＝0.0007)，促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复，细胞的恶性度降低。

关键词：CRISPR/Cas9、HPV E6、HPV E7、宫颈癌治疗

所属期刊栏目：43

资助基金：黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划UNPYSCT2015029;University Nursing Program for Young Scholars with Creative Talents in Heilongjiang ProvinceUNPYSCT2015029

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：69-75