MYH9 在食管癌细胞中的作用及其相互作用蛋白研究

摘要：

目的 研究非肌肉型肌球蛋白 MYH9 对食管癌细胞运动能力的影响,鉴定其尾部结构域( tail domain , TD )的相互作用蛋白.方法 利用 siRNA 在食管癌 KYSE5 1 0 细胞中敲降 MYH9 , Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,划痕实验检测细胞划痕愈合能力.构建MYH9 尾部结构域重组质粒 pGEX-KG-MYH9 ( TD ) ,诱导表达并亲和纯化 GST-MYH9 ( TD )融合蛋白.采用 GST pull-down 联合液相色谱-串联质谱技术,对 MYH9 尾部结构域相互作用蛋白进行鉴定分析.利用 clusterProfiler R 语言数据处理包对质谱分析发现的蛋白编码基因进行功能注释,利用免疫共沉淀( Co-immunoprecipitation , Co-IP ) 技术进一步鉴定.结果 敲降MYH9 显著抑制食管癌的细胞侵袭迁移( P <0. 001)和划痕愈合.质谱鉴定结果显示,食管癌 KYSE5 1 0 细胞中存在7 2 个潜在的与 MYH9 尾部结构域相互作用的蛋白. GO 富集分析结果显示,潜在的相互作用蛋白涉及多种生物学过程,包括 JAK-STAT 信号通路、细胞黏附调控、 NIK/NF-κB 信号通路、细胞周期检验点、膜脂筏形成、 DNA 转录起始、 mRNA 加工等. Co-IP 结果证实, PSIP1 和 BRG1 与 MYH9 存在相互作用.结论 MYH9 促进食管癌细胞侵袭运动,其尾部结构域介导多种与细胞运动相关蛋白的相互作用.

关键词：食管癌、MYH9 尾部结构域、侵袭迁移、相互作用蛋白

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资助基金：国家重点研发计划2017YFE0112100;国家自然科学基金81572841;中国医学科学院医学与健康科技创新工程CIFMS2016-I2M-1-001 Fund program : National Key R&D Program of China2 0 1 7 YFE0 1 1 2 1 0 0;National Natural Science Foundation of China8 1 5 7 2 8 4 1;CAMS Initiative for Innovative MedicineCIFMS2 0 1 6-I2 M-1-001

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：185-192