表达miR-10a的重组腺病毒的构建与鉴定

摘要：

目的 构建表达miR-10a的重组腺病毒(adenovirus,Ad)载体.方法 用红色荧光蛋白mCherry基因替换穿梭质粒pDC316-EGFP-U6的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因.利用表达siRNA的策略,合成编码miR-10a的长链DNA序列,双链退火后克隆至pDC316-mCherry-U6获得pDC316-mCherry-U6-miR-10a.pDC316-mCherry-U6-miR-10a与骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装成复制缺陷型重组腺病毒Ad-miR-10a,空斑形成实验纯化、扩增、滴定重组腺病毒.Ad-miR-10a感染HeLa细胞后在荧光显微镜下观察mCherry表达,用RT-qPCR检测miR-10a表达.结果 构建的pDC316-mCherry-U6-miR-10a序列正确,荧光显微镜下可见mCherry的表达,重组腺病毒Ad-miR-10a滴度为1.8 × 107pfu/mL,感染HeLa细胞后miR-10a表达较mock高40倍.结论 成功构建了表达miR-10a的重组腺病毒,siRNA表达策略可用于miRNA的人工表达.

关键词：miRNA、miR-10a、腺病毒载体、小干扰RNA

所属期刊栏目：34

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30872231;黑龙江省教育厅科技项目11531077

在线出版日期：2011-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：62-67