CyclinD1基因过表达慢病毒载体的构建和对神经干细胞增殖的影响
目的：针对小鼠 cyclinD1基因构建质粒并进行慢病毒包装，转染小鼠神经干细胞，检测其表达水平。方法：根据 cyclinD1基因信息，采用 DNA 重组技术将 Nestin promoter-Ccnd1基因插入 plenti6慢病毒表达载体，重组获得慢病毒载体 plenti-D1；经测序鉴定后，转染293T 细胞生产病毒液，并检测病毒滴度。设立空白对照组、阴性病毒对照组及过表达慢病毒感染组。将病毒转染小鼠胚胎神经干细胞，经实时荧光定量 PCR 和western blot 法分析转染前后3组 cyclinD1表达情况，MTT 法检测不同 MOI 值对神经干细胞增殖的影响。结果：测序结果证实 cyclinD1基因正确插入载体中，成功构建小鼠 cyclinD1基因过表达载体。实时荧光定量PCR 结果显示过表达慢病毒感染组 cyclinD1 mRNA 较其他2组明显升高； Western Blot 鉴定 cyclinD1蛋白表达成功。 plenti-D1的 MOI 值为10、20、50时均明显促进神经干细胞增殖。结论：cyclinD1基因慢病毒表达载体能感染小鼠胚胎神经干细胞，外源基因稳定表达。 cyclinD1基因过表达能促进神经干细胞的增殖。
cyclinD1、过表达、神经干细胞、细胞周期
R741;R741.02(神经病学与精神病学)
国家自然科学基金青年基金No.81100876；中国博管会基金面上项目No.2014M560910；中国医学科学院院校博士后基金2014M1330
2015-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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