人神经生长因子重组慢病毒载体构建及检测

摘要：

目的：构建含神经生长因子（NGF）基因的重组慢病毒载体，并在293T细胞中验证NGF是否可以过表达。方法：将NGF基因克隆至慢病毒穿梭质粒Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP，然后利用酶切鉴定、PCR鉴定及测序验证后，同两个辅助质粒共转染到293T细胞中，构建重组慢病毒载体。重组慢病毒感染293T细胞，通过荧光检测慢病毒的转染效果，用Western Blot检测NGF基因的表达。结果：酶切鉴定、PCR扩增鉴定和对重组慢病毒进行测序，提示重组慢病毒构建正确。荧光显微镜观察重组慢病毒感染的293T细胞，可见强荧光。Western Blot结果提示目的基因可正常表达。RT-PCR测得病毒滴度达到可利用标准。结论：人NGF重组慢病毒载体构建成功。

关键词：神经生长因子、慢病毒载体、糖尿病神经源性膀胱

分类号：R741;R694+.5(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金81170701

在线出版日期：2014-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：361-364