大鼠Ngb基因慢病毒表达载体构建及鉴定

摘要：

　　目的：克隆大鼠脑红蛋白(Ngb)基因，构建其慢病毒表达载体Lentivirus-Ngb，并转染原代培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法：人工合成大鼠Ngb cDNA，连接至pLenti6.3-IRES-EGFP慢病毒载体，选择阳性克隆进行酶切鉴定和测序，并将其包装至慢病毒，共转染293T细胞，收获病毒颗粒，检测病毒滴度，PCR检测Ngb的表达。用包装成功的病毒液感染BMSCs，显微镜下观察BMSCs细胞，Western-blot检测Ngb蛋白在BMSCs中的表达。结果：PCR产物双酶切和基因测序确定Ngb连接正确；感染72 h后，荧光显微镜下可以看到GFP阳性的BMSCs细胞，Westen-blot检测表明Ngb在感染慢病毒的BMSCs中表达。结论：成功构建大鼠Ngb基因慢病毒表达载体pLen-ti-Ngb-IRES-EGFP，并成功转染BMSCs。

关键词：脑红蛋白、慢病毒表达载体、骨髓间充质干细胞

分类号：R741;Q78(神经病学与精神病学)

在线出版日期：2013-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：235-238