重组Mash1慢病毒表达载体的构建

摘要：

目的:克隆小鼠Mash1基因的全长cDNA,构建其慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1, 为进一步研究Mash1在神经发育及干细胞神经分化中的作用奠定基础. 方法: 应用RT-PCR从小鼠13 d胚胎中扩增出Mash1 cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态细菌JM109,通过蓝白筛选、PCR扩增和双酶切鉴定出阳性菌落,并对其进行基因测序.BamHⅠ和XholⅠ双酶切pGEM-T-Mash1和Lentivirus获得的目的基因双粘片段与Lentivirus双粘线性质粒相连接,转化JM109,酶切方法鉴定重组阳性菌落.结果:PCR扩增、酶切分析及序列测定证实成功获取Mash1cDNA克隆;酶切鉴定证实Lentivirus-Mash1含有大小正确的正向Mash1cDNA片段.结论:成功建立了小鼠Mash1cDNA克隆并构建了慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1.

关键词：Mash1、慢病毒表达载体、RT-PCR

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分类号：R74(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金30570624;河南省教委杰出人才资助项目;河南省郑州市科技攻关项目03BA02BMYB05

在线出版日期：2006-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：105-107