Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病发病中细胞增殖的相关机制

摘要：

目的 探讨Notch1高表达急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)发病中,细胞增殖的相关机制及靶向药物干预效价.方法 选择Notch1高表达的T-ALL细胞株(A3、MOLT-4、Jurkat细胞株)和来源于20例健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)为研究对象.采用不同浓度(0、50、100 nmol/L)的细胞周期抑制剂palbociclib处理T-ALL细胞株与PBMC,采用CCK-8法检测其细胞增殖状态,计算不同浓度palbociclib处理时的半数抑制浓度(IC50)值,细胞涂片观察细胞形态,并且采用流式细胞术分析T-ALL细胞株与PBMC的细胞周期变化,实时荧光定量(RT)-PCR检测相关基因mRNA的相对表达水平.采用t检验比较不同浓度palbociclib处理后T-ALL细胞株与PBMC相关基因mRNA的相对表达水平等呈正态分布计量指标.结果 ①A3、MOLT-4细胞株Notch1基因表达的灰度值百分比,分别为(62.3±3.40)％、(77.6±4.71)％,显著高于PBMC的(20.8±1.53)％,并且差异均有统计学意义(t=6.236、10.034,P=0.025、0.008);Jurkat细胞Notch1基因表达的灰度值百分比为(28.5±1.36)％,与PBMC比较,差异无统计学意义(t=1.257,P=0.430).②相较于PBMC,MOLT-4细胞株增殖活性被palbocicib显著抑制,其次为A3细胞株,并且3种细胞增殖活性抑制呈明显时间和浓度依赖.经palbocicib处理48 h后,A3及MOLT-4细胞株的IC50值分别为(0.43±0.12)μmol/L和(0.10±0.06)μmol/L,显著低于PBMC的(0.83±0.15)μmol/L,前二者分别与后者相比,差异均有统计学意义(t=12.354、7.486,P=0.006、0.015).③细胞形态结果显示,相较于PBMC,经palbocicib 100 nmol/L处理后,A3和MOLT-4细胞株的细胞增殖受到明显抑制,细胞分散,簇状增殖现象消失.④细胞周期检测结果显示,经palbocicib 50 nmol/L处理时S+G2期A3、MOLT-4细胞株的细胞比例较palbocicib 0 nmol/L处理时显著降低,并且差异均有统计学意义(t=5.358、7.096,P=0.039、0.017);经palbocicib 50 nmol/L处理时S+G2期PBMC细胞比例与经palbocicib 0 nmol/L处理时比较,差异无统计学意义(t=2.324,P=0.160).经palbocicib 100 nmol/L处理时S+G2期A3、MOLT-4细胞株与PBMC的细胞比例均较经palbocicib 0 nmol/L处理显著降低,并且差异均有统计学意义(t=10.024、12.022、6.102,P=0.008、0.006、0.032).⑤经palbocicib 0 nmol/L处理时,A3、MOLT-4细胞株CDK4、CDK6、Notch1、Myc基因mRNA的相对表达量显著高于PBMC,差异均有统计学意义(A3细胞株与PBMC比较:t=6.953、6.058、7.210、4.692,P=0.021、0.034、0.026、0.045;MOLT-4细胞株与PBMC比较;t=8.541、5.267、0.536、8.735,P=0.019、0.038、0.007、0.015).经palbocicib 50、100 nmol/L处理时MOLT-4细胞株CDK4、CDK6、Myc基因mRNA的相对表达量均显著低于经palbocicib 0 nmol/L处理,并且差异有统计学意义(经palbocicib 50 nmol/L与经palbocicib 0 nmol/L比较:t=7.210、6.053、4.725,P=0.026、0.035、0.039经palbocicib 100 nmol/L与经palbocicib 0 nmol/L比较:t=13.579、12.025、12.019,P=0.005、0.006、0.006).经palbocicib 100 nmol/L处理时A3细胞株CDK4、CDK6、Myc基因mRNA的相对表达量显著低于经palbocicib 0 nmol/L处理,差异均有统计学意义(t=7.164、7.280、4.823,P=0.029、0.023、0.041).经palbocicib 50 nmol/L处理时A3、MOLT-4细胞株Notch1基因mRNA的相对表达量与palbocicib 0 nmol/L相比,差异无统计学意义(t=1.524、2.065,P=0.375、0.149).经palbocicib 100 nmol/L处理时,A3、MOLT-4细胞株Notch1基因mRNA的相对表达量显著高于palbocicib 0 nmol/L,差异均有统计学意义(t=5.162、6.206,P=0.037、0.028).结论 Notch1高表达的T-ALL细胞高表达CDK4、CDK6、Myc基因.palbociclib可以使T-ALL细胞的CDK4/6基因表达受到抑制,将细胞增殖阻滞在G1期.由此推测,palbociclib可以部分对抗Notch1基因对T-ALL细胞的促进细胞增殖作用.

关键词：白血病、T细胞、急性病、细胞增殖、受体、Notch1、Palbociclib

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资助基金：国家自然科学基金青年项目81300405;上海市科学技术委员会资助项目12401906700National Natural Science Foundation of China81300405;Fund of Shanghai Science and Technology Commission12401906700

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：369-378