染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定

摘要：

目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA(shRNA)表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株(SGC-shKIF4A)和稳定表达无意义shRNA的对照细胞(SGC-shNC);同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.

关键词：KIF4A、有丝分裂、纺锤体中央区、小分子干扰RNA、胃癌细胞

所属期刊栏目：37

分类号：Q78;R735(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;新世纪优秀人才支持计划;国家自然科学基金;天津师范大学中青年教授学术创新推进计划;天津师范大学校级博士基金;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金

在线出版日期：2014-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-25,后插4-后插5