MiR-125a-5p靶向胰岛素样生长因子1受体调节川崎病中内皮细胞的增殖和迁移

摘要：

目的:探讨miR-125a-5p靶向胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)对川崎病内皮细胞增殖与迁移的影响.方法:培养人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAECs),将细胞分为对照组(20％正常人血清)、20％川崎病血清组(20％川崎病患儿血清)、20％川崎病血清+抵制剂(inhibitor)正常对照(normal control,NC)组、20％川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组、20％川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+siRNA组、20％川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+si IGF1R组,除对照组添加20％正常人血清外,其余各组均添加20％川崎病患儿血清培养.定量RT-PCR法测定miR-125a-5p、IGF1R mRNA表达水平,蛋白质印迹法测定IGF1R蛋白表达;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法测定HCAECs细胞增殖能力;Transwell法测定细胞迁移能力;蛋白质印迹法测定Ki-67、血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cad)、p120连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)水平;构建野生型IGF1R重组质粒(pGL4-IGF1R-WT)和突变型IGF1R重组质粒(pGL4-IGF1R-MUT),将HCAECs细胞分为mimic-NC+pGL4-IGF1R-WT组、miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-WT组、mimic-NC+pGL4-IGF1R-MUT组、miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-MUT组,双荧光素酶报告实验测定miR-125a-5p与IGF1R mRNA的水平.结果:与对照组相比,20％川崎病血清组HCAECs细胞5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)结合率、miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均升高(均P<0.05),IGF1R mRNA与蛋白水平、HCAECs细胞光密度(optical density,OD)值、Ki-67均降低(均P<0.05);与20％川崎病血清组相比,20％川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组HCAECs细胞EdU结合率、miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均降低,IGF1R mRNA水平与蛋白水平、HCAECs细胞OD值、Ki-67均升高(均P<0.05);与20％川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组相比,20％川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+si IGF1R组HCAECs细胞EdU结合率miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均升高(均P<0.05),IGF1R mRNA与蛋白水平、HCAECs细胞OD值、Ki-67均降低(均P<0.05);与mimic-NC+pGL4-IGF1R-WT组对比,miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05);与mimic-NC+pGL4-IGF1R-MUT组相比,miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05).结论:川崎病内皮细胞损伤模型中miR-125-5p呈高表达,IGF1R呈低表达,miR-125-5p下调可靶向上调IGF1R表达,促进细胞增殖、迁移.

关键词：miR-125a-5p、胰岛素样生长因子1受体、川崎病、内皮细胞、增殖、迁移

所属期刊栏目：43

分类号：R734.2;R329.28;R285.5

资助基金：河南省医学科技攻关计划联合共建项目;郑州儿童医院联合共建项目

在线出版日期：2023-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：211-220