MiRNA-218对PAG1的调控及其对卵巢癌干细胞的影响

摘要：

目的:研究miR-218在卵巢癌干细胞(ovarian cancer stem cells,OCSCs)中的表达,并探讨其对PAG1的调控作用和对OCSCs的影响及作用机制.方法:收集卵巢癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代卵巢癌细胞,用流式细胞仪筛选出CD133+表型的OCSCs.采用Western印迹法检测干性特异相关基因Nanog和Sox2蛋白的表达.qRT-PCR检测miR-218在OCSCs中的表达.miR-218 mimic转染OCSCs,分为miR-218 mimic组和miR-218 NC组,MTS检测各组OCSCs增殖;软琼脂克隆实验检测各组OCSCs肿瘤球形成能力的影响;miR-218过表达慢病毒质粒及对照质粒vector感染OCSCs,经1.0 μg/mL嘌呤霉素筛选稳定过表达miR-218或vector的OCSCs细胞,注射到BALB/c裸鼠中,观察miR-218对OCSCs体内成瘤能力的影响.Targetscan 7.2预测软件及双荧光素酶报道基因试验,分析miR-218对PAG1基因的靶向作用,qRT-PCR检测miR-218 mimic组和miR-218 NC组OCSCs中PAG1mRNA的表达.Western印迹法检测miR-218 mimic组和miR-218 NC组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达.结果:Nanog和Sox2蛋白在CD133+表型OCSCs中的表达显著高于CD133-表型OCSCs中的表达;miR-218在CD133+表型OCSCs中的表达显著低于CD133-表型OCSCs中的表达(P＜0.05).miR-218 mimic组OCSCs增殖减慢,OCSCs肿瘤球形成能力下降.OCSCsmiR-218裸鼠成瘤体积显著低于OCSCsvector组(P＜0.05).TargetScan7.2软件预测和双荧光素酶报道基因试验证实PAG1为miR-218的靶基因,miR-218 mimic组PAG1 mRNA的表达减少.Western印迹法检测miR-218 mimic组OCSCs中pSrc和pAKT蛋白的表达显著减少.结论:MiR-218在OCSCs中低表达,可能通过靶向下调PAG1,抑制pSrc和pAKT蛋白的表达影响OCSCs的干性.

关键词：卵巢癌、miRNA-218、PAG1、干性

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在线出版日期：2019-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：706-713